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抗體查找方法

2016/5/23 15:22:23??????點擊:

在查找抗體的時候,常常被多個抗體貨號和不同的抗體信息所困擾,不知道該如何選擇合適的抗體。本篇文章希望能為大家選擇合適的抗體提供幫助。

一、一抗(primary antibody)的選擇

1)蛋白的名稱及亞型。蛋白的名稱及亞型:某些蛋白具有多種不同的亞型,如Akt1、2、3,這需要在選擇抗體之前確定要研究的蛋白亞型。如果抗原選擇的是不同蛋白亞型共有的肽段區(qū)域,那我們需要選擇可以同時識別Akt1、2、3等多個亞型的抗體。

2)磷酸化修飾位點。檢測磷酸化修飾的蛋白,選擇抗體時則需知道修飾位點。

3)抗體已驗證的應(yīng)用(如WB,IHC,IP等)。抗體一般會對抗體應(yīng)用(WB,IHC,IP, ChIP,IF,F(xiàn)low)進行內(nèi)部驗證,選擇抗體時需知道客戶的實驗類型。

4)抗體能夠識別的樣本種屬。抗體一般會對不同種屬目標樣本進行內(nèi)部驗證,選擇抗體時需知道客戶的樣本來源。

5)制備抗體的抗原。抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來,其中的免疫原包括:全長蛋白、蛋白片段、多肽、全有機體(如:細菌)或細胞。

6)抗體的動物來源。一抗的動物來源多為兔(rabbit)和小鼠(mouse),如果客戶已有二抗,選擇抗體時需知二抗的類型。

二、二抗(secondary antibody)的選擇

1)要考慮一抗的物種來源。例如:如果選擇的一抗是小鼠的單/多克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗anti-mouse secondary antibody。

2)二抗的選擇要考慮具體的應(yīng)用類型。酶聯(lián)(HRP或AP偶聯(lián))二抗常用于免疫印跡和免疫組化等,熒光標記二抗則常用于免疫熒光和流式等。



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